Cómo lavar eritrocitos y preparar una solución al 5%

Fundamento

El lavado de eritrocitos es un procedimiento utilizado en inmunohematología para eliminar del plasma y del sobrenadante sustancias que pueden interferir con las pruebas serológicas, principalmente proteínas plasmáticas, anticuerpos libres, complemento y otros componentes solubles.

El procedimiento consiste en suspender los eritrocitos en una solución isotónica, centrifugarlos y eliminar cuidadosamente el sobrenadante. Este proceso se repite varias veces hasta obtener eritrocitos adecuadamente lavados.

El lavado es importante, entre otras aplicaciones, en la realización de pruebas de Coombs directo e indirecto, preparación de suspensiones de eritrocitos y otras técnicas inmunohematológicas. La solución salina isotónica permite mantener la integridad de los eritrocitos durante el procedimiento.

Objetivo

Realizar correctamente el lavado de una muestra de eritrocitos mediante solución salina isotónica, eliminando los componentes plasmáticos y obteniendo una suspensión de eritrocitos adecuada para posteriores pruebas de laboratorio.

Materiales

- Tubos de ensayo.

- Gradilla.

- Pipetas Pasteur o pipeta automática.

- Puntas desechables.

- Centrífuga.

- Cronómetro.

- Marcador para identificar los tubos.

Reactivos

- Muestra de sangre con anticoagulante EDTA (tubo lila).

- Solución salina fisiológica.

Procedimiento

A. Preparación de la muestra

1. Identificar correctamente el tubo que contiene la muestra de sangre.

2. Homogeneizar suavemente la muestra para asegurar una distribución uniforme de los eritrocitos.

3. Coloqué de 0.2 a 0.5ml (2 a 3 gotas) de la muestra en un tubo de ensayo limpio y correctamente identificado.

B. Primer lavado

4. Agregar solución salina fisiológica al tubo que contiene los eritrocitos hasta el 50% de la capacidad del tubo.

5. Mezclar suavemente para resuspender completamente los eritrocitos.

6. Centrifugue a 1000rpm por 1 a 2 minutos.

7. Una vez terminada la centrifugación, retire el sobrenadante sin perder el botón de eritrocitos.

C. Lavados posteriores

9. Agregar nuevamente solución salina fisiológica al sedimento eritrocitario hasta el 50% de la capacidad del tubo.

10. Resuspender completamente los eritrocitos mediante agitación suave.

11. Centrifugar nuevamente.

12. Eliminar cuidadosamente el sobrenadante.

13. Repetir los pasos de resuspensión, centrifugación y eliminación del sobrenadante hasta completar tres lavados.

D. Obtención de los eritrocitos lavados

14. Después del último lavado, eliminar completamente el sobrenadante.

15. Resuspender los eritrocitos y homogenizar suavemente en lo poco que sobró de solución salina.

E. Solución de eritrocitos al 5%

16. Una vez que se lavaron tres veces los eritrocitos prepare con ellos una solución al 5% con solución salina fisiológica.

17. En un tubo de ensaye coloque 1 gota de eritrocitos lavados mas 19 gotas de solución salina fisiológica

Precauciones

- No utilizar solución salina contaminada o fuera de las especificaciones del laboratorio.

- Evitar una resuspensión excesivamente vigorosa que pueda producir hemólisis.

- Retirar el sobrenadante cuidadosamente para evitar la pérdida de eritrocitos.

Resultado esperado

Al finalizar el procedimiento se obtiene un sedimento de eritrocitos libre de proteínas plasmáticas y otras sustancias solubles presentes en la muestra original. Los eritrocitos deben conservar una apariencia adecuada, sin evidencia significativa de hemólisis.

Conclusión

El lavado de eritrocitos es una técnica fundamental en inmunohematología porque permite eliminar componentes solubles que pueden interferir con las reacciones antígeno-anticuerpo. La correcta ejecución de los ciclos de suspensión, centrifugación y eliminación del sobrenadante permite obtener eritrocitos adecuados para diferentes pruebas serológicas.